流式細胞檢測技術：細胞周期與凋亡流式術

更新時間：2025-08-13 | 點擊率：764

　　流式細胞檢測技術（Flow Cytometry，簡稱FCM）在細胞生物學研究中具有重要地位，特別是在細胞周期與凋亡的檢測方面。以下是對流式細胞檢測技術在細胞周期與凋亡應用方面的詳細闡述：

　　一、流式細胞檢測技術概述

　　流式細胞術是一種高效的用于單細胞分析/分選的生物學技術，它利用流式細胞儀對處于快速直線流動狀態(tài)中的單列細胞或生物顆粒進行逐個、多參數(shù)、快速的定性、定量分析或分選。通過特定的熒光標記抗體或染料對細胞進行染色，流式細胞儀可以檢測細胞表面的標記物、細胞內(nèi)的蛋白質(zhì)、DNA含量等，從而實現(xiàn)對細胞性質(zhì)的區(qū)分和分析。

　　二、流式細胞檢測技術在細胞周期中的應用

　　細胞周期是指細胞從一次分裂完成開始到下一次分裂結(jié)束所經(jīng)歷的全過程。在真核生物中，細胞周期分為處于阻留狀態(tài)的G0期、分裂間期、分裂期（M期），其中分裂間期又分為DNA合成前期（G1期）、DNA合成期（S期）與DNA合成后期（G2期）。流式細胞術檢測細胞周期的原理主要是基于細胞DNA含量的變化。在細胞周期的不同階段，DNA含量存在差異，因此可以通過DNA染料（如碘化丙啶PI）對細胞進行染色，并通過流式細胞儀檢測熒光強度來判斷細胞所處的周期階段。

　　流式細胞術在細胞周期檢測中的應用包括：

　　1.鑒定G0/G1期、S期、G2/M期細胞比例，為臨床診療提供量化依據(jù)。

　　2.評估腫瘤細胞增殖活性，輔助判斷化療敏感性。例如，急性白血病患者骨髓細胞S期比例超過20%提示預后不良；實體瘤組織檢測中G2/M期細胞增多可能與放射治療抵抗相關。

　　三、流式細胞檢測技術在細胞凋亡中的應用

　　細胞凋亡是細胞的一種程序性死亡，是生物體中普遍存在的現(xiàn)象。流式細胞術檢測細胞凋亡的原理主要是基于細胞形態(tài)的變化、細胞表面磷脂酰絲氨酸（PS）的外翻、線粒體跨膜電位的塌陷、DNA片段化等特征。其中，膜聯(lián)蛋白V（Annexin V）與碘化丙啶（PI）聯(lián)合使用是檢測細胞凋亡的常用方法。

　　Annexin V是一種Ca2+依賴性磷脂結(jié)合蛋白，能夠高親和力地結(jié)合到PS上。由于凋亡早期細胞的PS外翻，因此Annexin V可以與這些細胞結(jié)合。而PI是一種熒光核酸染料，由于分子較大無法穿透活細胞的完整細胞膜，因此只能進入膜完整性受損的細胞（如凋亡中晚期和壞死細胞）。通過Annexin V與PI的聯(lián)合染色，可以在流式細胞儀上區(qū)分活細胞、早期凋亡細胞、中晚期凋亡細胞和壞死細胞。

　　流式細胞術在細胞凋亡檢測中的應用包括：

　　1.鑒定凋亡細胞并區(qū)分細胞凋亡和壞死。

　　2.評估藥物或輻射等處理對細胞凋亡的影響。

　　四、流式細胞檢測技術的優(yōu)勢與注意事項

　　流式細胞術在細胞周期與凋亡檢測中的優(yōu)勢包括：

　　1.快速、準確：能夠在短時間內(nèi)對大量細胞進行多參數(shù)測量。

　　2.多參數(shù)分析：可以同時檢測細胞表面的標記物、細胞內(nèi)的蛋白質(zhì)、DNA含量等。

　　3.高靈敏度：能夠檢測到微量的細胞變化。

　　然而，在使用流式細胞術進行檢測時也需要注意以下事項：

　　1.樣本新鮮度：離體后六小時內(nèi)完成處理可避免細胞降解。

　　2.操作規(guī)范：需設置同型對照排除非特異性染色，采用合適的內(nèi)參校準儀器。

　　3.結(jié)果解讀：需要結(jié)合病理形態(tài)學和免疫分型綜合判斷，避免單一指標誤診。